人工授精就是用人为的方法采集公畜的精液，经过检查和处理后，利用器械再输入到母畜的生殖道内，使精子与卵子相结合，达到使母畜受孕的目的。下面主要介绍目前广泛应用的直肠把握式母牛人工授精的操作过程及注意事项。
1. 确定配种时间
对发情母牛适时配种，可以提高受胎率，因此要确定排卵时间和配种适宜时间。决定母牛配种时间的因素有排卵时间、卵子保持受精能力的时间及精子在母牛生殖道内保持受精能力的时间。母牛一般在发情结束后5～15小时排卵，在排卵后6～12小时保持受精能力，精子在母牛生殖道内保持受精能力的时间为24～48小时。
确定配种时间比较准确的方法是直肠检查法，但是大多数情况下依靠询问畜主母牛发情时间、观察母牛外阴部变化来确定最适宜的输精时间。输精人员向畜主询问受配母牛年龄、胎次、发情等情况，仔细观察母牛表现：母牛神态转向安定，发情表现开始减弱，外阴部肿胀开始消失，子宫颈稍有收缩，黏膜由潮红变为粉红，直检时卵泡皮变溥，有弹力，卵泡液明显波动时，可输精。
2. 解冻
将细管冻精从液氮罐中迅速取出,把封闭的一端置于38~39度的水杯中,水浴解冻10秒后取出，拭去水珠待用。
3. 镜检
先将显微镜置于操作台或桌面上,对载玻片消毒后放到显微镜上,调好光。将解冻好的细管封闭的一端剪去,剪口捏圆,挤一滴于载玻片上镜检精子活力。冷冻精子的活力不得低于0.3。
4. 装枪
将解冻的细管冻精装入输精枪,套上塑料外套管。输精人员带上长臂手套。
5. 消毒
将接受输精的母牛固定在六柱栏内保定好，尾巴固定于一侧，用0.1%的高锰酸钾溶液对外阴部彻底消毒,用卫生纸拭干外阴部。
6. 输精
一般有开膣器输精法和直肠把握式输精法两种,目前常用的是直肠把握式输精法。具体操作方法是：输精人员左手伸入直肠内，寻找并把子宫颈后端轻轻固定在手内，手臂向下按压，使阴门张开，右手持输精器，从阴门插入，先向上倾斜插入一段（5～10厘米），避开尿道口，再平插至子宫颈口，然后两手配合，将输精器前端穿过子宫颈管中的皱壁轮，导入子宫颈深部，推动输精枪活塞，把精液注入子宫颈管中，然后抽出输精器。
输精时，有些牛会出现努责、弓腰现象，可由其他人员用手压迫腰椎，操作者在直肠内的手握住子宫颈稍往前推，使阴道弛缓，或者等停止努责后再插入，防止造成阴道破损；如果母牛摆动剧烈时，要把输精管放松，手随母牛的摆动而摆动，以免输精管断裂和损伤阴道；如果遇到子宫下垂，可用手握住子宫颈，慢慢向上拉，输精管就容易插入。
这种方法的优点是精液可以注入子宫颈深部，受胎率可提高10～20%；对牛的刺激小，无痛感，特别适于处女牛使用；用具简单，操作安全方便。输精时要轻插、适深、缓注、慢出，防止精液逆流。输精结束后，要对输精器械消毒,进行有关登记，以便掌握怀孕天数和预计分娩日期。
