外周血是除骨髓之外的血液,临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中,再从血液中提取分离得到造血干细胞,我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞 ,在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。
- 中文名称 外周血
- 外文名称 peripheral blood
- 含义 骨髓之外的血液
- 含量 0.01%
简介
[英] peripheral 变示blood
正常人外周血中一般看不见幼稚的干细胞,只存在有极少量的造血干细胞,其含量为0.01%左右。如果幼稚细胞的比例大幅增加,有可能是类白血病。正因为存在0.01%的造血干细胞,可利用细胞分离的技术(血细胞自动分离机),将外周血中含有造血干细胞的单个核细胞进行分离保存,重复数次达一定细胞数量后,回输给患者以之代替骨髓而进行的干细胞移植,称为外周血干细胞移植。
培养基配制
配制用水
培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的称束业电阻应为200万欧姆,来自一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的
双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。
培养基
培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2~7.4,若pH值超
过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐360百科高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。
血清
新积会营执北集念议心刑培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛推乙血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10-15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。
抗菌素
为防止培养时期细松坐雨菌的污染,可在培养基中添加适当抗菌素,一般用量与组织细胞培养相同:卡那霉素100单位/毫升,或双抗--青霉素100单位/
毫升,链霉素100微克/毫升。
己够植物血凝素(PHA)
非增殖期的细胞不能制备染色体,如人外周血淋巴细胞,但在离体培养过程中,在PHA话主决选的作用下,可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分贵事音裂。
经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-4处最区界胡府8小时和68-72小时。
PHA有粘多糖,蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂,蛋给承斗白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加,直至全部免疫活性细胞均
被激活跟院左题料为止,但PHA浓晶机操度过高会引起凝集,一论诗怎按速剧蛋急便白副般采用4%浓度为好。