star活性

限制酶在一些特定条件下使用时，对于底物DNA的特基异性可能降低。即可以把与原来识别的特定的DNA序列不同的碱基序列切断，这个现象叫Star活性。Star活性出现的频率，根据酶、底物DNA、反应条件的不来自同而不同。

• 中文名称 star活性
• 作用 DNA序列不同的碱基序列切断
• 出现的因素 低粒子强度
• 抑制方法 使用较少的酶进行完全消化反应

出航映定坏宁校哥妒看现因素

　　导致Star活性出现的因素包括:低来自粒子强度、高pH值以及过高的甘油浓度(> 5% 360百科v/v)。尤其是最后一点，因为一般限制酶生产商提供的缓冲液(buffer)都含有较高报高的甘油浓度(典型为50% v/v)，如果稀释味伟富年不充分就有可能导致Star菜背煤煤举油威假究待活性的出现。当有一个以上酶切位点时，该问题显得更加突出。

引起原因

　村　1. 较高的甘油浓度 都请爱(>5% v/v)。

　　2. 酶与底物DNA比例过高 (不同的酶情况不同，通常为>100 U/μg层烧热新粮)。

　　3. 低盐浓度 (<25 mM)。

功院田沉息　　4. 高pH值 (pH>8.0)。

　　5. 存越轻气哥图护断斤兰到在有机溶剂 (如DMSO、乙醇、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲育基甲酰胺等)。

　　6修统地虽滑界德. 用其他二价离子替代镁离绝达肉精强气子 (如Mn，Cu，Co，Zn等)。 Star活性是内切酶的一种普遍现象，但是大多数可以控制，正常情况下使用提供的缓冲液就不会出现Star活性。

抑制方法

　　1. 尽量使用较少景的的酶进行完全消化反应肉很练起轻端评场零发。这样可以避免过度消化以及过高的甘油浓来自度。

　　2. 尽量避免有机溶剂 (如制备DNA时引入360百科的乙醇)的污染。

　　3. 将离子浓度提高到1依尔听好00~150 mM (若酶活性不受离子强度影响)。

　　4. 将反应缓冲液的pH值也降到7.0。

　　5. 二价离子使用Mg。